Mikrobiologi Klinik

MIKROBIOLOGI KLINIK

Pemeriksaan laboratorium mikroorganisme adalah salah satu cara untuk menentukan keadaan kesehatan seseorang dengan melalui cairan tubuh, sehingga jenis penyebab penyakit dapat disebabkan oleh :

1. Bakteri

2. Parasit

3. Jamur

Bakteriologi

Adalah pewaaan untuk bakteri yang rutin dilaksanakan dilaboraturium klinik pewarnaan yang dilakukan antara lain :

• Garam menentukan gram negatif atau positif

• Ziehl Neilsent untuk mewarnai bakteri tahan asam (TBC, Leprae )

• Loeffler

• Niesser untuk mewarnai microbacterium lepra

Tekhnik Pewarnaan Gram

1. Cara lama

Carbol gentian violet diteteskan : 1’ – 3’

Larutan loe : ¾ - 1

Alkohol 96 % : 1’

Cucui air : bersih

Diberi Fuehsin : 1’

Cuci air kembali : bersih keringkan mikroskope

2. Kristal Violet :1’

Cuci air

Lugol : 1’

Cuci air

Alkohol aceton (alkohol 96 % + aseton (1:1)) : 15”

Cuci air

Safranin : 30”

Cuci air bersih keringkan mikroskope (yg biasanya digunakan adalah mikroskope optik 10 objek x 100 optik ).

Untuk pewarnaan gram bila gram (+) berwarna violet

Untuk pewarnaan gram bila gram (-) berwarna merah

Ziehl Nielsen

Tujuannya adalah untuk mewarnai micobacterium TB Paru dan Micobacterium Leprae. Bakteri-bakteri tersebut dilapisi oleh lilin sehingga bila bahan cat /pewaa tidak bisa menempel pada kuman tersebut, untuk itu perlu pemanasan untuk menghilangkan/mengurangi lapisan lilin tersebut.

Hot Method

Cara pemeriksaan ini adalah :

• Objek glass ditetesi carbol fuchsin, lalu panaskan sampai menguap, untuk kuman/penyakit: - TBC : 2' - 5

- Lepra : 10'

• Cuci dengan air bersih

• Acid alkohol : bertujuan untuk menghilangkan exes/kelebihan zat warna, untuk penyakit : - TBC : 3 %

- Lepra : 1 % sampai warna luntur

• Cuci air

• Metilin biru : 15"

• Cuci air keringkan mikroskop

Catatan : TBC dan Leprae menghasilkan warna biru

Pemeriksaan Bakterium Difteri ada 2, yaitu :

1) Loeffer

R/ Methilin biru : 0,3 gr

Alkohol 96 % : 30 cc dicampur

KOH 0,01 % : 70 cc

Lama pengecatan : 3' - 5'

Cuci air kemudian keringkan

Note : fiksasi pada bahan ini hanya dipanaskan saja (bahan/sputum/diletakkan pada objek glass)

2) Neisser

Neisser terbagi 3 yaitu :

(1) Neisser A

R/ Metilin blue : 1 gr

Alkohol 96 % : 20 cc

Glacial Acetil Acid : 50 cc dicampur

Aquades ad : 1000 cc

(2) Neisser B

R/ Kristal violet : 1 gr

Alkohol 96 % : 10 cc dicampur

Aquadest ad : 300 cc

(3) Neisser C

R/ Bismarch grown : 1 gr

Aquadest panas ad : 300 cc dicampur

Cara :

• Neisser A + Neisser B (2:1) : 20"

• diteteskan pada objek glass yang ada sampel

• cat dibuang(tidak perlu dicuci.

• Neisser C : 20 " kemudian dicuci lalu dikeringkan

Tekhnik Pewarnaan

Bahan (sputum, cairan pleura, dll) diletakka pada objek dengan menggunakan alat "Ose"

tabung reaksi Ose alat pembakar ojek glass yg bertutup

Gbr. alat yang digunakan.

Sampel dalam bentuk cairan :

• Ose dipanaskan dulu, tunggu sebentar lalu celupkan pada sampel.

• Ose dogosokkan pada objek gelas sehingasampel melakat pada objek lalu dikeringkan.

• Bahan tersebut difixer (diletakkan di atas api) sehingga bakteri tersebut menempel pada permukaan objek glass.

• Kemudian ke labratorium untuk melakukan pewarnaan.

Bahan Swab

Masukan tabung dan ose ke dalam aotoclop (161 C) selama 2 jam, setelah dingin bahan ini digunakan untuk mengambil sampel (pengambilan sampel harus cepat agar tidak terkontaminasi), msukkan, sebelum ditutup ujung tabung dipanasi dulu kemudian bahan dimasukkan tanpa menyentuh bibir tabung lalu ditutup dan dikirim ke laboratorium.

Bahan yang diperiksa:

• Cairan otak

• Darah

• Urine/sekret uretra

• Swab

Warna :

• Gram

• Ziehl Neisser

Kultur :

• Blood agar

• Nutrient agar

• Lawenstein Jensen (biasanya untuk Tubrkolosis)

Blood agar digunakan minimal 5' - 10' darah (darah domba yang dipelihara tanpa kontak dengan antibiotika).

Dalam kultur akan tumbuh koloni, koloni ini dikultur lagi dalam cairan iodium cair, contoh :

1 2 3

Keterangan gambar :

Dari tiap gosokan muncul koloni baru dan akan diinkubasi

Setelah diinkubasi :

Koloni yang ada dimasukan dalam nutient agar/ blood agar.

Inkubasi lagi 37 C

Lakukan uji sensitifitas test

letakan bahan pada medium agar sambil digoyang-goyang

siapkan plate kecil-kecil yang berisi macam-macam antibiotika

medium agar

Bahan yang ada antibiotika diletakkan adalam medium agar, ditutup, disimpan dalam inkubator 37 C semalam, dan keesokan harinya akan dilihat

Bila ada bakteri A, diberi klorampenicol jika sensitif akan membentuk diameter dan tetap jernih, karena tidak ada bakteri.

Tetapi bila tetap keruh (bakteri tetap berkembang ) berarti bakteri tersebut resisten terhadap klorampenicol.

Catatan :

Diameter semakin luas maka semakin sensitif

Materi Kuliah Patologi Klinik

Pertemuan tgl 13 Juni 2001

Lemak dan Gangguan Fungsi Endotel

fraksi lemak : asam lemak, lipoprotein, cholesterol

lemak berfungsi sebagai : • Cadangan energi

• Pelumas

• Bantalan

Lemak(asam lemak)

Asal makanan :

• Makanan

Piruvat

• Gluokosa

Pengendalian Sistesin Asam Lemak

Glukagon fosforilasi

Glukgenesis dipicu

Lemak ihambat glukosa

Sintesis lemak

Dipicu

insulin

- Glukagon memicu fosforilasi

- Insulin memicu sintesis lemak

Note : sel  pankreas mengeluarkan insulin

sel  pankreas mengeuarkan glukagon

Glukosa darah  glukosa darah 

 sel  sel

glukagon insulin

Lipoprotein :

- Chilomikron mukosa usus halus

- VLDL

- HDL diproduksi dihati.

HDL berfungsi sebagai sarana pengangkut kolesterol

Kolesterol ester kolesterol asam lemak

Lesitin kolesterol asil transferase dibentuk pada hati

diikat pada HDL

Ester kolesterol yang terbentuk

Dipindah ke

Chilomkron VLDL hidrolisis

Oleh lipase dalam sel (lisosom)

Jadi VLDL & HDL berperan dalam proses pengaturan kolesterol

Bila pemasukan kolesterol meningkat

Diikat oleh HDL

Dihilangkan oleh hati

Peningkatan HDL LDL yang berarti pembuangan kolesterol perifer 

ateroslerosis

Bila terjadi hyperkolesterolemia sebagian LDL mengalami oksidasi menjadi

Lisofosfotidil cholin

Minioxid LDL menstimulsi radikal superoxid

LDL beroksidasi N O  superoksid beraksi denan N O

m.oxy LDL menginduksi endotel

mengeluarkan mediator

V – CAM (Vaskuler Cell Addison Melekol)

MCF (Monosit Cemtatif Factor)

MCSF (Macrophag Coloni Stimulatory Factor)

Adanya MCF mengakibatkan monosit bergerak menuju endotel

Adanya V-CAM : monosit melekat pada endotel

Masuk ke intma area

Foam Cell Fagositir makrofag

m. oxy LDL

macrofag memiliki reseptor permukaan Scavanger (ABL)

Khsusnya Scavenger A mempunyai kemampuan mengikat

(Scavenger kolagen) Ligan (protein yang dapat mengikat

suatu fas /antibodi)

Foam Cell memiliki Ligan

Scavenger Ligan

Apotosis

Pembuluh darah rapuh

Debris pecah

Debris difagositosis oleh monosit

TGF  1 (Transformin Glutamic Factor  1)

Fibrosit Fibrous kaku

Penyempitan pembuluh darah

Penyempitan pembuluh darah iskemia ATP terganggu

Neksosis pembengkakan lonik pump terganggu

Endotil normal membentuk N.O

L. Arginin N.Hidroxyl L.Arginin

Hidrolisis oxidasi

N O

Fungsi N.O adalah :

- Menghambat perlekatan / agregasi trombosit pada endotil

- Menghambat perlekatan monosit pada endotil

- Melindungi LDL dari proses oksidasi :

• Asap rokok

• Polutan

• Ozon

Radikal bebas Anti Oxidan

Gangguan pada N.O Trio BEC

• Vitamin Beta carotin

• Vitamin E

• Vitamin C

I n s t r u m e n

1. Microskop Cahaya

Inverted

Elektron SEM

TEM

2. Fotometer

Yang dinilai adalah absorben (penyerapan)

Sinar MC

Sinar P.C filter Galvanometer terbalik

Bahan pekat sinar akan banyak diserap sinar diteruskan -

Sedikit jarum angka rendah

3. Spektrum fotometer with prisma